禽流感病毒NS1蛋白抑制人RIG-I泛素化和干扰素信号，但不抑制鸭
发布时间：
2023-08-08
甲型流感病毒非结构蛋白1(NS1)是促进病毒复制和控制宿主细胞免疫反应的主要毒力因子。它是一种小而多功能的蛋白，仅在宿主细胞中表达，参与多种蛋白-蛋白相互作用，调节病毒RNA合成，控制宿主蛋白表达，抑制先天免疫信号传导。
禽流感病毒NS1蛋白抑制人RIG-I泛素化和干扰素信号，但不抑制鸭
• 研究背景
甲型流感病毒非结构蛋白1(NS1)是促进病毒复制和控制宿主细胞免疫反应的主要毒力因子。它是一种小而多功能的蛋白，仅在宿主细胞中表达，参与多种蛋白-蛋白相互作用，调节病毒RNA合成，控制宿主蛋白表达，抑制先天免疫信号传导。NS1蛋白的两个最深入研究的功能是与切割和多腺苷化特异性因子4 (CPSF4)的相互作用和对视黄酸诱导基因I (RIG-I)信号通路的干扰。通过结合和隔离人类CPSF4来阻断宿主mRNA成熟，实现宿主蛋白合成的广泛和非特异性关闭。NS1蛋白通过干扰RIG-I信号通路，阻断I型干扰素(IFN-a和IFN-b)的诱导和随后的抗病毒反应，因此RIG-I是流感病毒感染早期检测关键模式识别受体。同时TRIM25被认为是抗病毒RIG-I通路的共激活因子。野鸭是禽流感病毒的天然宿主，具有悠久的共同进化史和独特的疾病动力学，因此野鸭比大多数其他受感染的物种更能抵抗流感引起的疾病，
目前尚不清楚对人TRIM25的抑制是所有甲型流感NS1蛋白的普遍功能还是具有毒株依赖性和NS1蛋白是否类似地靶向绿头鸭的TRIM25。
• 研究内容
本篇文章围绕禽流感蛋白NS1序列差异和甘氨酸-184-转精氨酸(G184R)突变、NS1蛋白与人源鸭源TRIM25的相互作用、NS1蛋白是否阻止人源鸭源的TRIM25（或TRIM25同源二聚体）和RIG-I受体之间结合、NS1蛋白是否抑制人源鸭源TRIM25介导的RIG-I泛素化、NS1蛋白是否能抑制人体中干扰素的分泌来展开研究。
通过对NS1蛋白序列的分析和对野生型、突变型NS1蛋白的分析，证明了甘氨酸-184-精氨酸(G184R)的点突变挽救了NS1蛋白在人源HEK293T和鸡源DF-1两种细胞类型中异源表达。
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通过对HEK293T细胞和DF-1细胞中表达的的flag标记的NS1和V5标记的人、鸭TRIM25进行了免疫荧光分析、免疫共沉淀分析结果得出，NS1蛋白与人源和鸭源TRIM25都相互作用，但在结合人TRIM25的能力上表现出毒株特异性差异。
在缺乏和存在NS1蛋白的情况下，通过对共表达了GST标记的RIG-I和TRIM25的细胞进行 (GST)下拉和克隆人源鸭源TRIM25的GST标记结构域片段的方式，证明了NS1蛋白不阻止人源鸭源TRIM25（或TRIM25同源二聚体）和RIG-I的关联。
在存在和不存在NS1的情况下，通过在含有RIG-I和TRIM25的细胞中共表达了HA标记的泛素蛋白，证明了NS1蛋白抑制TRIM25介导的人RIG-I受体泛素化，但不抑制鸭RIG-I受体泛素化和信号传导。
利用病毒感染肺泡细胞系A549,利用缺乏整个NS1开放阅读框(del-NS1)的重组PR8病毒作为干扰素抑制的阴性对照，通过qPCR对病毒含量和干扰素含量进行量化，证明了所有NS1蛋白都能在病毒感染过程中抑制人体中干扰素的产生。
• 总结
实验结果表明NS1蛋白对人TRIM25的抑制具有毒株依赖性；NS1蛋白同靶向人源TRIM25一样类似地靶向鸭源TRIM25，但不会干扰鸭RIG-I受体泛素化和干扰素在其细胞中的信号传导。
Key words：
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